毛發(fā)檢測(cè)新型毒品的研究進(jìn)展

所謂“新型毒品”主要是相對(duì)鴉片、海洛因、大麻等傳統(tǒng)麻醉藥品而言，由人工化學(xué)合成的致幻劑、興奮劑類毒品。是由國(guó)際公約及我國(guó)法律法規(guī)所規(guī)定管制的直接作用于人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有較強(qiáng)興奮或抑制作用，連續(xù)使用能使人產(chǎn)生依賴性的一類化學(xué)毒品。

與傳統(tǒng)的鴉片類毒品相比，新型毒品主要通過化學(xué)合成，因?yàn)槠錇E用多發(fā)生在娛樂場(chǎng)所，所以又被稱為“俱樂部毒品”、“休閑毒品”、“假日毒品”。

新型毒品主要通過化學(xué)合成，其成分、含量、外觀不同，名字也五花八門。但根據(jù)新型毒品的毒理性質(zhì)和主要成分，大致可以將其分為4類：第一類以中樞興奮作用為主，主要指苯丙胺類(Amphetamine-type Stimulants，ATS)興奮劑，即結(jié)構(gòu)中含有苯丙胺結(jié)構(gòu)的化合物，代表物質(zhì)是甲基苯丙胺(Methamphetamine，MA，在我國(guó)俗稱“冰毒”) ;第二類是致幻劑，代表物質(zhì)是氯胺酮(
Ketamine，KET，俗稱“K”粉)；第三類兼具興奮和致幻作用，代表物質(zhì)是3，4-亞甲二氧基甲基苯丙胺(3，4-ethylenedioxymethanphetamine，MDMA，搖頭丸的主要成分) ，屬于苯丙胺的衍生物; 第四類是一些以中樞抑制作用為主的物質(zhì)，包括氟硝西泮(Flunitrazepam，FLU)和γ-羥基丁酸(Gamma Hydroxybutyrate，GHB) ，以上代表物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)如左下所示。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)吸食新型毒品的人數(shù)每年增長(zhǎng)30%左右，其中青少年占了86%。新型毒品的濫用造成了嚴(yán)重的個(gè)體危害和社會(huì)危害，為了有效打擊新型毒品犯罪，緊密配合公安等執(zhí)法部門的禁毒需要，分析工作者們建立了一系列準(zhǔn)確、快速、高靈敏的定性定量分析檢測(cè)新型毒品的方法。而毛發(fā)作為毒品的一個(gè)特殊載體，具有其他檢材不可比擬的優(yōu)勢(shì)，取材容易，攜帶方便，易長(zhǎng)期保存且毒品在毛發(fā)中代謝較慢可長(zhǎng)期存在，因此毛發(fā)中毒品的分析已成為法庭科學(xué)和臨床分析的研究熱點(diǎn)，發(fā)揮著越來越重要的作用。

1 毛發(fā)的前處理技術(shù)

毛發(fā)中的毒品主要位于毛發(fā)的角質(zhì)層和髓質(zhì)層內(nèi)，和蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，因此在檢驗(yàn)毛發(fā)中的毒品之前需要對(duì)毛發(fā)樣品進(jìn)行前處理，將毒品從毛發(fā)中釋放出來，同時(shí)也要消除毛發(fā)外部的油脂、汗液以及各種污染物。對(duì)前處理技術(shù)方法的選擇，在具體操作過程中，應(yīng)參照目標(biāo)藥物的性質(zhì)與分析目標(biāo)，采用適合的處理方法。應(yīng)同時(shí)考慮以下幾種情況：1)所有被分析物的種類及其代謝物在處理過程中是否破壞其穩(wěn)定性；2)分析物的回收率；3)定性和定量過程所采用的分析方法；4)是否能夠達(dá)到分析目的。本文首先對(duì)查閱文獻(xiàn)的前處理技術(shù)和分析方法進(jìn)行了歸納，詳見表1。

去除毛發(fā)的污染，均可采用二氯甲烷或水-丙酮沖洗或超聲振蕩，這也是毛發(fā)最常見的清洗方法，有文獻(xiàn)報(bào)道兩者清洗效果無明顯差別，二氯甲烷試劑單一，步驟簡(jiǎn)單，但揮發(fā)時(shí)間較丙酮長(zhǎng)。分析ATS、MDMA時(shí)，也有報(bào)道采用0.1%SDS(十二烷基磺酸鈉)-水清洗，少數(shù)報(bào)道采用其他方法清洗，如甲醇、異丙醇、吐溫以及洗潔精等，另外清洗的次數(shù)不宜太多，一般為2～3次，過多次數(shù)的清洗也會(huì)降低毛發(fā)中樣品的濃度。

目前，釋放毛發(fā)中新型毒品的水解方法主要有堿水解、酸水解、甲醇水解、酶水解和醇酸混合水解。堿水解的主要方法是將毛發(fā)在1mol/LNaOH中50～100℃加熱15～30分鐘。堿水解可使毛發(fā)溶解，固化在角蛋白中的毒品及代謝物藥物釋放完全，因此對(duì)于堿性條件下比較穩(wěn)定的化合物，堿水解成為首選方法。有關(guān)毛發(fā)中苯丙胺類毒品分析的報(bào)道中50%以上采用NaOH水解，而采用其他水解方法的報(bào)道多因同時(shí)分析KET、去甲基氯胺酮(NOR，KET 的主要代謝物) 以及嗎啡(MOR) 等其他堿性條件下不穩(wěn)定的物質(zhì)。何洪源等也曾系統(tǒng)考查了毛發(fā)的多種水解(及提取) ，包括堿水解、酸水解及有機(jī)溶劑超聲提取等方法，然后用相同的方法萃取、檢測(cè)，通過毒品與內(nèi)標(biāo)的峰面積比來比較不同方法的水解效果。最后確定了毛發(fā)中苯丙胺類毒品的最佳水解方法是堿水解。分析GHB時(shí)，所查閱的文獻(xiàn)均報(bào)道采用NaOH水解，但方法是將毛發(fā)在0.01mol/LNaOH中隔夜孵化。Goulle曾對(duì)各種水解方法進(jìn)行了比較：1mol/L
NaOH95℃加熱15分鐘，0.1和0.01mol/L NaOH、0.1和0.05mol/LH2SO4、0.6mol/LHCI、0.5mol/LNH4Cl，水、磷酸緩沖液56℃孵化16小時(shí)以及甲醇超聲4小時(shí)，結(jié)果顯示堿水解的回收率明顯提高，尤其是1mol/L NaOH水解的回收率高達(dá)98%，但因1mol/L NaOH 水解時(shí)雜質(zhì)干擾較多，且GHB屬極性物質(zhì)，若在接下來的提取步驟中采用分子量較小的三甲基硅烷(TMS)衍生化時(shí)，采用0.01mol/L NaOH水解是最佳的選擇，若改用分子量較大的叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMS) 衍生化，能消除干擾，則可采用1mol/L NaOH加熱水解。

酸水解通常是將發(fā)毛在0.1mol/L的鹽酸中60℃以下孵化數(shù)小時(shí)到一整夜，酸水解條件較為溫和，在堿性條件下不穩(wěn)定的物質(zhì)可采用此法，如K 粉以及代謝物。甲醇水解主要方法是超聲振蕩，甲醇水解因藥物釋放不完全且提取物雜質(zhì)較多，因此單純采用甲醇水解的報(bào)道較少。酶水解是將毛發(fā)置于酶(如蛋白酶K)中低溫水浴加熱，該法在中性PH下進(jìn)行，不穩(wěn)定的藥物降解少。對(duì)酸堿適用范圍廣、快速、徹底、專屬性強(qiáng)，但成本相對(duì)較高。對(duì)酸堿敏感的FLU可采用酶水解或甲醇水解。

醇酸混合水解，即甲醇與鹽酸或三氟乙酸按不同體積比混合后超聲振蕩或隔夜孵化進(jìn)行水解。Kim對(duì)5種水解方法(結(jié)合提取方法)
的水解效率進(jìn)行了比較研究，結(jié)果顯示：水解效率從高到低依次為0. 25mol/L 甲醇化的HCl50℃超聲＞5mol/L HCl/甲醇(V/V=1：20)50℃超聲＞1mol/L NaOH95℃加熱10分鐘＞1mol/LHCl 50℃隔夜孵化＞甲醇超聲1小時(shí)。Wu也對(duì)各種水解條件進(jìn)行了研究，得出分析苯丙胺類毒品，NaOH水解回收率最高，但當(dāng)同時(shí)需分析堿性條件下不穩(wěn)定的其他毒品及其代謝物時(shí)，甲醇/三氟乙酸(8.5：1.
5)的混合液隔夜孵化是最佳選擇以上方法為毛發(fā)水解的主要方法，除此之外，還有個(gè)別報(bào)道采用緩沖溶液進(jìn)行水解的。

毛發(fā)中新型毒品及其代謝物的提取方法有液-液萃取(Liquid-liquid extraction，LLE) 、固相萃取(Solid-phase extraction，SPE)、固相微萃取(Solid-phase micro-extraction SPME)、液相微萃取(Liquid-phase micro-extraction，LPME)、微型研磨提取(Micropulverized extraction，MPE)等方法。LLE是最傳統(tǒng)的毒品提取方法，毛發(fā)水解后，調(diào)PH到適當(dāng)值，加入乙酸乙酯或環(huán)己烷、正己烷、乙醚等有機(jī)溶劑，漩渦振蕩、離心，取有機(jī)相，在50℃左右氮?dú)饬飨麓蹈桑偌佑袡C(jī)溶劑溶解或衍生化后分析測(cè)試。該方法設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，適于各種毒品的提取分離，成本低，易推廣。但它帶入的雜質(zhì)較多，需進(jìn)一步凈化，且繁瑣費(fèi)時(shí)，難以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。目前，分析毛發(fā)中的新型毒品中有60%以上的分析報(bào)道采用LLE提取法。SPE利用物質(zhì)在溶劑與吸附劑(固定相)間選擇性吸附與洗脫操作，達(dá)到分離凈化和富集目的。具有選擇性強(qiáng)，簡(jiǎn)單、快速、取樣量小，節(jié)省溶劑等優(yōu)點(diǎn)，可用于大體積樣品中微量組分的富集，也是提取毛發(fā)中毒品的有效手段。

SPME集采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體，其選擇性好、靈敏度高，便于攜帶，操作時(shí)間短，樣品用量小，無需萃取溶劑，能實(shí)現(xiàn)樣品的現(xiàn)場(chǎng)采集和富集，可直接與氣相色譜儀或液相色譜儀聯(lián)用，尤其是頂空固相微萃取技術(shù)(HS-SPME)，操作簡(jiǎn)單、快速，可有效避免不揮發(fā)性物質(zhì)的干擾，在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已表現(xiàn)出強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì)。Gentili采用HSSPME分析毛發(fā)中的ATS，將毛發(fā)、內(nèi)標(biāo)物和30%NaOH
置于小玻璃瓶?jī)?nèi)，快速密封后70℃加熱20分鐘，吸取頂空物質(zhì)采用氣相色譜二級(jí)質(zhì)譜法分析，獲得了滿意的效果，檢出限在1ng/mg以下，回收率在90%以上，水解與提取可在同一裝置內(nèi)進(jìn)行，且無需衍生化。LPME的萃取模型包括靜態(tài)液相微萃取和動(dòng)態(tài)液相微萃取。具有有機(jī)溶劑用量小，污染少；集目標(biāo)物的萃取、純化、濃縮于一步，操作簡(jiǎn)單，勞動(dòng)強(qiáng)度小; 無需特殊設(shè)備，成本低等特點(diǎn)，近年來，作為一種新型的樣品前處理技術(shù)，已經(jīng)引起了環(huán)境分析領(lǐng)域的許多研究人員的注意，但在毒品分析領(lǐng)域僅有少數(shù)報(bào)道，孟品佳采用動(dòng)態(tài)LPME-微波衍生化的方法提取發(fā)毛中的ATS和MDMA等物質(zhì)，毛發(fā)經(jīng)NaOH水解后，直接加入小體積50μL氯仿進(jìn)行渦旋提取1分鐘，離心1分鐘，不經(jīng)過氮?dú)獯蹈蛇^程，直接吸取下層氯仿溶液20μL在微波加熱的條件下進(jìn)行衍生化反應(yīng)后測(cè)試。該方法把消解、提取、衍生化和檢測(cè)等過程環(huán)環(huán)相扣地結(jié)合在一起，無需調(diào)節(jié)pH、揮發(fā)溶劑等過程，簡(jiǎn)化了操作過程，減少了損失，而且方法的靈敏度高、重復(fù)性好、成本低，適合于毛發(fā)中微量苯丙胺類毒品的檢測(cè)。

近年來，Hajime等發(fā)展了微型研磨萃取法(Micropulverized extraction，MPE)，利用微型研磨機(jī)對(duì)水介質(zhì)中的毛發(fā)進(jìn)行研磨，使之變成微米尺寸的粉末，增大其表面積，有利于藥物的釋放，且經(jīng)研磨后的毛發(fā)角質(zhì)層被破壞，有利于溶劑滲入到毛發(fā)內(nèi)部，提取毛發(fā)皮質(zhì)層和髓質(zhì)層內(nèi)的毒品。其具體做法是：將1mg 洗凈的毛發(fā)置于2mL的塑料試管中，加入不銹鋼的研磨子彈和100μL10mmol/L的磷酸鹽緩沖液，蓋上蓋子，運(yùn)用自動(dòng)粉碎機(jī)垂直振搖5分鐘(1500次/每分鐘)，離心后用鑷子取出研磨子彈，再用0.45μm微孔的聚偏二氟乙烯薄膜過濾后用于液相色譜分析。該作者用此方法提取毛發(fā)中的AP(苯丙胺)和MA，回收率可達(dá)96.4%-108.2%，與傳統(tǒng)的消解提取過程相比，樣品用量少，僅需1mg；樣品處理僅需在一個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上即可進(jìn)行，集水解和提取于一體，且無需溶劑的揮發(fā)過程，避免了各種污染；若采用液相色譜分析，整個(gè)處理和分析過程( 不包括清洗) 不超過30分鐘。該作者還將該提取方法分別結(jié)合GC/MS和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)分析毛發(fā)中的MA，當(dāng)采用MPEELISA測(cè)定時(shí)，樣品分析與處理過程簡(jiǎn)單、快速，無需溶劑揮發(fā)，無需提供氮?dú)狻⒋蠊β逝c真空設(shè)備，所需設(shè)備簡(jiǎn)單、可攜帶，因此可實(shí)現(xiàn)樣品的現(xiàn)場(chǎng)分析。但該方法目前主要應(yīng)用于提取毛發(fā)中的MA，提取其他毒品的應(yīng)用尚在研究之中。Kim也報(bào)道了MPE法提取毛發(fā)中的AP、MA、MDMA等物質(zhì)，但操作方法不同，該作者取10mg毛發(fā)利用玻珠研磨機(jī)研磨1.5分鐘，在1ML甲醇中50℃超聲孵化1小時(shí)，揮干溶劑，用HFBA50℃衍生化30分鐘，進(jìn)氣相色譜分析，每一種物質(zhì)的檢出限均可達(dá)0.028ng/mg，回收率8.9%-101.2%，方法簡(jiǎn)單、快速。

毛發(fā)中毒品或代謝物含量甚微，一般為ng/mg水平，且測(cè)試時(shí)需經(jīng)過提取、凈化等前處理過程，需采用靈敏度較高、準(zhǔn)確性好的儀器分析法，常見的有氣/質(zhì)聯(lián)用(GC/MS)法、氣/質(zhì)聯(lián)用串聯(lián)質(zhì)譜法(GC/MS/MS)、高效液相色譜(HPLC)法、液質(zhì)聯(lián)用串聯(lián)質(zhì)譜法(LC
/MS/MS)法等方法，也有個(gè)別報(bào)道采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CZE)。GC/MS 是分析毛發(fā)中毒品的主要方法，有近50%的文獻(xiàn)報(bào)道采用GC
/MS。但對(duì)于新型毒品來說，因結(jié)構(gòu)中多含有胺基或羥基等極性基團(tuán)，采用GC/MS分析時(shí)一般需要對(duì)樣品進(jìn)行衍生化，以改善樣品的氣相色譜性質(zhì)或質(zhì)譜行為，提高檢測(cè)毒品靈敏度，苯丙胺類及其衍生物主要采用酰基化將胺基轉(zhuǎn)化為酰胺，常用的衍生化試劑主要有三氟乙酸酐(TFAA)、三氟乙酰氯(TFAP)、七氟丁酸酐(HFBA)、N-甲基-雙三氟乙酰胺(MBTFA)等；而對(duì)于含有羥基的GHB毒品，則需進(jìn)行硅烷化以取代結(jié)構(gòu)中的活性氫，降低氫鍵的束縛，提高被檢測(cè)能力，文獻(xiàn)采用的硅烷化試劑為N，O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺(
BSTFA)+三甲基氯硅烷(TMCS)：(99+1)和叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMS)。

HPLC法也能將目標(biāo)藥物從干擾基質(zhì)中分離，且不受分析物揮發(fā)性、極性、熱穩(wěn)定性的限制，流動(dòng)相可選擇范圍寬，可以分離各種分子量范圍的物質(zhì)，近幾年來多篇文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC法分析毛發(fā)中的新型毒品，對(duì)于沸點(diǎn)比較高的KET和FLU，查閱到的文獻(xiàn)均采用HPLC法分析。串聯(lián)質(zhì)譜法即質(zhì)譜-質(zhì)譜(MS/MS) 聯(lián)用技術(shù)，是一種新興的分析技術(shù)，它由二級(jí)以上的質(zhì)譜儀串聯(lián)而成，是融分離和鑒定為一體的分析方法，與單級(jí)質(zhì)譜相比，能明顯改善信號(hào)的信噪比，具有更高的靈敏度和選擇性，其檢測(cè)水平可以達(dá)到pg級(jí)，能檢測(cè)出吸食者吸食一次計(jì)量的毒品，非常適合于痕量組分的分離和鑒定，因此，在毛發(fā)中的毒品分析方面顯示了極大的優(yōu)越性，目前，MS/MS多與GC和LC聯(lián)用，形成GC-MS/MS和LC-MS/MS分析方法，成為毛發(fā)中毒品分析方法的一個(gè)新趨勢(shì)，所查閱的2010年之后的文獻(xiàn)中近60%采用串聯(lián)質(zhì)譜法，而FLU和KET的報(bào)道均采用LC-MS/MS分析法。

隨著新型毒品濫用程度的嚴(yán)重化，對(duì)新型毒品的分析檢測(cè)在法庭科學(xué)領(lǐng)域也變得越來越重要。而毛發(fā)作為毒品的一個(gè)特殊載體，具有取材方便，容易保存，不受污染等特點(diǎn)，且可提供長(zhǎng)期、可靠、全面的毒品使用信息，因此毛發(fā)檢材的使用越來越受到法庭科學(xué)工作者的重視。人們?cè)诓粩嗵剿鹘⒖焖佟⒑?jiǎn)單、有效的前處理方法和準(zhǔn)確、快速、靈敏的分析方法。隨著儀器設(shè)備性能不斷改善，分離技術(shù)不斷提高，毛發(fā)檢材中新型毒品及其代謝物的檢測(cè)方法也逐步向成熟化、標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化、快速化、靈敏化、現(xiàn)場(chǎng)化發(fā)展，但值得一提的是，分析時(shí)應(yīng)注意將水解方法、提取方法等前處理技術(shù)與分析方法相互結(jié)合，達(dá)到最優(yōu)化的分析檢測(cè)程序，而不應(yīng)將各程序彼此孤立。

來源: 毒品檢測(cè)中心  本文來源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系我司，會(huì)盡快刪除。